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原代细胞的培养方法

来源:admin  浏览量:  发布时间:2019-03-27 15:45:09

  原代细胞最接近和最能反映体内生长特性,适宜用于药物敏感性试验、细胞分化等实验研究。

  原代细胞的培养,也叫初代培养,是从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养,是建立细胞系的第一步,是一项基本技术。

  原代细胞的培养方法一般有以下4种:

  ① 组织块培养法

  组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中,瓶壁可预先涂以胶原薄层,以利于组织块粘着于瓶壁,使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

  ② 消化培养法

  ③ 悬浮细胞培养法

  对于悬浮生长的细胞,如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化,可采用低速离心分离,直接培养,或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

  ④器官培养

  器官培养是指从供体取得器官或组织块后,不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养,器官培养可保持器官组织的相对完整性,可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响,以及局部环境的生物调节作用。

  原代细胞的培养条件:

  一、静置贴壁细胞(包括半贴壁细胞的培养)培养

  1、细胞要通过充分漂洗,以尽量除去消化液的毒性;

  2、细胞接种时浓度要稍大一些,至少为5×108细胞/L;

  3、培养基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培养;

  4、 胎牛血清浓度为10%-80%;

  5、应在37℃5% CO2的培养箱中培养;

  6、在起始的2天中尽量减少振荡,以防止刚贴壁的细胞发生脱落,漂浮;

  7、待细胞基本贴壁伸展并逐渐形成网状,应将原代细胞换液;

  8、用骨髓或外周血中的悬浮细胞经静置培养1周时,应将细胞悬液经低速离心后换液。

  二、悬浮细胞培养

  1、原代培养时要尽量去除红细胞;

  2、短期培养,可在含10%小牛血清的RPMI1640培养基中进行;

  3、细胞浓度可在5-8×109/L范围内,进行分瓶试验;

  4、长期培养时,淋巴细胞中要加入生长因子,白血病细胞中要加入少量的原患者血清,以利细胞生长;

  5、细胞换液一般每隔3天需半量换液一次;

  6、细胞传代一般待细胞增殖加快、细胞密度较高时才能进行。